D. Yu. Ryazantsev, E. M. Chudinova, L. Yu. Kokaeva, S. N. Elansky, P. N. Balabko, G. L. Belova, S. K. Zavriev.
කොලෙටොට්රිචම් කොකෝඩ්ස් ෆයිටොපතෝජනික් දිලීරය අර්තාපල් සහ තක්කාලිවල අන්තරාදායක රෝග ඇති කරන අතර එය ඇන්ත්රැක්නෝස් සහ අල කළු ලප ලෙස හැඳින්වේ. රූප විද්යාත්මක ලක්ෂණ අනුව, ඒවා වෙනත් ක්ෂුද්ර ජීවීන් විසින් ඇති කරන රෝග වලින් වෙන්කර හඳුනා ගැනීම බොහෝ විට දුෂ්කර ය; හරිත තක්කාලි පලතුරු වල, රෝගය රෝග ලක්ෂණ රහිත විය හැකි අතර, ඉදුණු රතු පලතුරු මත පමණක් ප්රකාශ වේ. රෝග කාරකය පිළිබඳ ඉක්මන් හා නිවැරදි රෝග විනිශ්චය සඳහා, තත්ය කාලීන PCR පරීක්ෂණ පද්ධතියක් පිරිනමනු ලැබේ. පරීක්ෂණ පද්ධතියක් සංවර්ධනය කිරීම සඳහා, රුසියාවේ විවිධ ප්රදේශවල අර්තාපල් අල වලින් හුදකලා කරන ලද 45 C. cocodes වික්රියා වල glycerol triphosphate dehydrogenase ජානයේ නියුක්ලියෝටයිඩ අනුපිළිවෙල තීරණය කරන ලදී.
ලබාගත් ප්රතිඵල සහ GenBank දත්ත ගබඩාවේ ඇති අනෙකුත් විශේෂවල සමාන අනුපිළිවෙලවල් විශ්ලේෂණය මත පදනම්ව, C. කොකෝඩ් සඳහා විශේෂ-විශේෂිත ප්රයිමර් සහ පරීක්ෂණයක් නිර්මාණය කරන ලදී. නිර්මාණය කරන ලද පරීක්ෂණ පද්ධතියේ නිශ්චිතභාවය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා, තක්කාලි සහ අර්තාපල් ශාක (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis Phosoli, Alternaria alternata, Helminthosporium, ආශ්රිත පරපෝෂිත සහ saprotrophic දිලීර විශේෂ 15 ක පිරිසිදු සංස්කෘතීන්ගෙන් හුදකලා වූ DNA සමඟ PCR සිදු කරන ලදී. , Colletotrichum coccodes Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis Phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. clados). Colletotrichum coccodes DNA වල පැවැත්ම 20-27 එළිපත්ත චක්රයකදී තීරණය කරන ලද අතර අනෙකුත් විශේෂයන් චක්ර 40කට පසුව අනාවරණය කර ගෙන හෝ අනාවරණය කර නොගන්නා ලදී. විශ්ලේෂණ කළ PCR මිශ්රණයේ 0.01 ng / mm3 ට වැඩි C. cocodes DNA සාන්ද්රණය විශ්වාසදායක ලෙස හඳුනා ගැනීමට පරීක්ෂණ පද්ධතිය මඟින් හැකි වේ. සංවර්ධනය කරන ලද පරීක්ෂණ පද්ධතිය දිලීර රෝග වල රෝග ලක්ෂණ සහිත තක්කාලි කොළවල සහ රෝගයේ බාහිර රෝග ලක්ෂණ නොමැතිව අර්තාපල් අලවල C. කොකෝඩ් තිබීම විමර්ශනය කිරීමට භාවිතා කරන ලදී. දිලීර ආසාදන රෝග ලක්ෂණ සහිත කොළ Krasnodar කලාපයේ විවිධ ක්ෂේත්ර දෙකකින් එකතු කරන ලදී, අල - Kostroma, මොස්කව්, Kaluga, Nizhny Novgorod ප්රදේශ වල ක්ෂේත්ර වලින්. C. coccodes DNA අඩංගු එක් තක්කාලි කොළයක් Krasnodar ප්රදේශයෙන් සොයා ගන්නා ලදී; කොස්ට්රෝමා, මොස්කව්, කළුග ප්රදේශ වල වගා කරන ලද අල සාම්පල 5ක මෙම රෝග කාරකයේ DNA වල සැලකිය යුතු පැවැත්මක් අනාවරණය විය.
හැඳින්වීම
කොලෙටොට්රිචම් කුලයට අයත් හතු යනු ධාන්ය වර්ග, එළවළු, ඖෂධ පැළෑටි, බහු වාර්ෂික පළතුරු සහ බෙරී ශාකවලට බලපාන භයානක ෆයිටොපොතජන් වේ. මෙම කුලයේ සර්වසම්පූර්ණ විශේෂ වලින් එකක්, Colletotrichum coccodes (Wallr).
හියුස් යනු ඇන්ත්රැක්නෝස් රෝග කාරකය වන අතර අර්තාපල් සහ තක්කාලි වල කළු ලප සහ සොලනේසී පවුලේ අනෙකුත් ශාක ගණනාවක රෝග ඇති කරයි. වල් පැලෑටි (ඩිලර්ඩ්, 1992). C. coccodes ශාකයේ සියලුම භූගත කොටස්, කඳේ පාද, කොළ සහ පලතුරු වලට බලපායි (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994). ආසාදිත අර්තාපල් අලවල පීල් මත, නොපැහැදිලි ලෙස උච්චාරණය කරන ලද දාර සහිත අළු ලප වර්ධනය වීම නිරීක්ෂණය වන අතර, ඒ මත ස්පෝරුලේෂන් සහ මයික්රොස්ක්ලෙරෝටියා කළු තිත් පැහැදිලිව දැකගත හැකිය. ගබඩා කිරීමේදී, අලවල පල්ප් තුළ මෘදු වූ අන්තර්ගතයන් සහිත වණ සෑදිය හැක, i.e. රෝගය ඇන්ත්රැක්නෝස් අවධියට ඇතුළු වන අතර එය අතිශයින් දුර්ලභ ය.
ඒ අතරම, ඇන්ත්රැක්නෝස් රෝග ලක්ෂණ (කුඩා කළු තිත් සහිත සමේ වණ) තක්කාලි පලතුරු වල සාමාන්ය වේ. කොළ මත, C. කොකෝඩ් වල රෝග ලක්ෂණ තද දුඹුරු පැහැ ලප ලෙස දිස්වන අතර, සාමාන්යයෙන් කහ පටක වලින් මායිම් වේ (Johnson, 1994).
අල මත කළු ලප වර්ධනය වීම ඔවුන්ගේ පෙනුම නරක් වන අතර එය සෝදාගත් රතු සමක් ඇති අර්තාපල් විකිණීමේදී විශේෂයෙන් ප්රකාශ වේ. පීල් ඉවත් කිරීම අතිරික්ත වාෂ්පීකරණයට සහ ගබඩා පාඩු වැඩි කිරීමට හේතු වේ (Hunger and McIntyre, 1979). අනෙකුත් ශාක අවයව වලට හානි වීම අස්වැන්න අහිමි වීමට හේතු වේ, එය විවෘත හා සංවෘත බිම් දෙකෙහිම සටහන් විය (Johnson, 1994; Tsror et al., 1999). C. coccodes මගින් ඇතිවන රෝග රුසියාව ඇතුළුව ලෝකයේ සියලුම අර්තාපල් නිෂ්පාදනය කරන ප්රදේශ වල බහුලව දක්නට ලැබේ (Leesa, Hilton, 2003; Belov et al, 2018). සී.
C. කොකෝඩ් වල එන්නත බීජ අල වල පැවතිය හැක (කියවන්න, සඟවන්න, 1988; Johnson et al., 1997), තක්කාලි බීජ (Ben-Daniel et al., 2010), පසෙහි, ශාක සුන්බුන් මත දිගු කාලයක් නොනැසී පවතී. (Dillard, 1990; Dillard and Cobb, 1993) සහ කිරිඳි වල (Raid, Pennypacker, 1987). කතුවරුන් ගණනාවකගේ කෘති (කියවන්න, සඟවන්න, 1988; Barkdoll, Davis, 1992; Johnson et al., 1997; Dillard, Cobb, 1993) පෙන්නුම් කළේ අර්තාපල් සහ තක්කාලි වල රෝගය වර්ධනය වීම බොහෝ දුරට රඳා පවතින්නේ එහි පැවැත්ම මත බවයි. බීජ හා පසෙහි inoculum. එමනිසා, රෝගයෙන් සිදුවන පාඩු අවම කර ගැනීම සඳහා, බීජ ද්රව්යවල, පසෙහි, බීජ අර්තාපල් අල සහ තක්කාලි බීජ ගබඩා කිරීම සඳහා තබා ඇති දිලීර වල පැතිරීම (ප්රමාණාත්මකව ඇතුළුව) හඳුනා ගැනීම අවශ්ය වේ. පස සහ ශාක ද්රව්යවල රූප විද්යාත්මක රෝග විනිශ්චය සිදු කළ හැක්කේ මයික්රොස්ක්ලෙරෝටියා තිබීමෙන් පමණක් වන අතර ඒවා වෙනත් දිලීර වල ද දක්නට ලැබේ.
අලවල ඇති රෝග ලක්ෂණ Helminthosporium solani නම් දිලීර නිසා ඇති වන රිදී පත්රවලට බෙහෙවින් සමාන ය. Colletotrichum coccodes සහ Helminthosporium solani පිරිසිදු සංස්කෘතියකට හුදකලා කිරීම තරමක් අපහසු වන අතර පෝෂක මාධ්යයක මන්දගාමී වර්ධනය හේතුවෙන් දිගු කාලයක් ගතවේ. Colletotrichum coccodes ඉක්මනින් හඳුනා ගැනීම සඳහා, උපකරණ රෝග විනිශ්චය ක්රම භාවිතා කිරීම අවශ්ය වේ. වඩාත් පහසු ක්රමය වන්නේ පොලිමරේස් දාම ප්රතික්රියාව (PCR) සහ එහි වෙනස් කිරීම - තත්කාලීන PCR. දැනට, rDNA හි ITS2002 කලාපය සඳහා බ්රිතාන්ය පර්යේෂකයන් (Cullen et al., 1) විසින් සංවර්ධනය කරන ලද පරීක්ෂණ පද්ධතියක් යුරෝපයේ සහ එක්සත් ජනපදයේ භාවිතා වේ. එහි භාවිතය රුසියානු හුදකලා විශ්ලේෂණයේ හොඳ ප්රතිඵල පෙන්නුම් කර ඇත (Belov et al, 2018). කෙසේ වෙතත්, C. coccodes ඉතා විචල්ය වන අතර තනි DNA අනුක්රමයකින් එය හඳුනා ගැනීම ව්යාජ ඍණාත්මක ප්රතිඵලවලට තුඩු දිය හැකිය. වඩාත් විශ්වාසදායක රෝග විනිශ්චය සඳහා, විශේෂ-විශේෂිත DNA අනුක්රම කිහිපයක් විශ්ලේෂණය කිරීම අවශ්ය වන අතර, ඒ සම්බන්ධව අපි Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ජානයේ අනුපිළිවෙලින් C. කොකෝඩ් හඳුනා ගැනීමට ඉඩ සලසන මුල් පරීක්ෂණ පද්ධතියක් සකස් කර ඇත.
ද්රව්ය සහ ක්රම
නිර්මාණය කරන ලද පරීක්ෂණ පද්ධතිවල කාර්යක්ෂමතාව සහ නිශ්චිතභාවය තක්සේරු කිරීම සඳහා, අපි තක්කාලි කොළ සහ පලතුරු, අර්තාපල් අල (වගුව 15) වල රෝගී සාම්පල වලින් කතුවරුන් විසින් හුදකලා කරන ලද දිලීර විශේෂ 1 ක පිරිසිදු සංස්කෘතීන් භාවිතා කළෙමු. හුදකලා කිරීම සඳහා, අපි දිලීර ආසාදන රෝග ලක්ෂණ සහිත ශාක අවයව ගත්තා, බුෂ් එකකට එක් අවයවයකට වඩා වැඩි නොවේ.
ලෙල්ලක් සහිත අල පෙත්තක්, තක්කාලි ගෙඩියක පෙත්තක් සහ බලපෑමට ලක් වූ පත්රයක් දුරදක්න අන්වීක්ෂයක් යටතේ තබා, පසුව mycelium, බීජාණු හෝ පටක කැබැල්ලක් agar මාධ්යයකට (wort agar) මාරු කරනු ලැබේ. මුවහත් කරන ලද විච්ඡේදක ඉඳිකටුවක් සහිත පෙට්රි කෑමක්. හුදකලා 4 ° C දී පරීක්ෂණ නල වල agar slant මත ගබඩා කර ඇත.
එකතු කළ වහාම (ක්ෂේත්රයේ) විශ්ලේෂණය සඳහා අදහස් කරන දිලීර රෝග වල රෝග ලක්ෂණ සහිත තක්කාලි කොළ සාම්පල 70% එතිල් මධ්යසාරයක තැන්පත් කර ඇති අතර ඒවා DNA හුදකලා වන තෙක් ගබඩා කර ඇත. අර්තාපල් අල රසායනාගාරයට ලබා දී, ඒවායින් භාවිතෙය්දී (2 × 1 සෙ.මී. කෑල්ලක්) සහ -20 ° C දී ශීත කළ. DNA හුදකලා වන තෙක් ශීත කළ ගබඩා කර ඇත.
DNA හුදකලා කිරීම සඳහා දිලීර වල පිරිසිදු සංස්කෘතීන් දියර කඩල මාධ්යයෙන් වගා කරන ලදී. දිලීරයේ mycelium ද්රව මාධ්යයෙන් ඉවත් කර, පෙරහන් කඩදාසි මත වියළා, ද්රව නයිට්රජන් වල ශීත කළ, සමජාතීය කර, CTAB බෆරයේ පුර්වගත කර, ක්ලෝරෝෆෝම් වලින් පිරිපහදු කර, isopropanol සහ 0.5 M පොටෑසියම් ඇසිටේට් මිශ්රණයකින් අවක්ෂේප කර, 2% කින් දෙවරක් සෝදා ඇත. මත්පැන්. එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස DNA deionized ජලයේ දියකර –70 ° C (Kutuzova et al., 20) හි ගබඩා කර ඇත. DNA සාන්ද්රණය මනිනු ලැබුවේ Qubit 2017 (Qiagen, Germany) මත ද්විත්ව කෙඳි DNA සඳහා HS DNA ප්රමාණ කිරීමේ කට්ටලයක් භාවිතා කරමිනි. ඇල්කොහොල් සහ ශීත කළ සාම්පල ද්රව නයිට්රජන් වල මිශ්ර කර, පසුව ඉහත විස්තර කර ඇති පරිදි DNA නිස්සාරණය සිදු කරන ලදී (පිරිසිදු දිලීර සංස්කෘතීන්හි mycelium සඳහා).
වගුව 1. කාර්යයේ භාවිතා කරන දිලීර වික්රියා වල මූලාරම්භය
බිම්මල් නම | ශාක, අවයව | තෝරා ගන්නා ස්ථානය |
---|---|---|
Colletotrichum cocodes 1, C. coccodes 2, C. cocodes 3, Ilyonectria crassa, Rhizoctonia solani | අර්තාපල් අල | කොස්ට්රෝමා කලාපය, 1 වන ක්ෂේත්ර පරම්පරාවේ අර්තාපල් අල, රතු ස්කාර්ලට් ප්රභේදය |
Colletotrichum cocodes 4 | අර්තාපල් කොළ | නියෝජිත මාරි එල්, යොෂ්කර්-ඕලා |
හෙල්මින්තොස්පෝරියම් සොලනි | අර්තාපල් අල | මගදන් කලාපය, තැ.කා.සි. කූඩාරම, අර්තාපල් අල |
Cladosporium fulvum | තක්කාලි කොළ | මොස්කව් කලාපය, විශාල පලතුරු තක්කාලි |
Alternaria tomatophila | තක්කාලි පළතුරු | පැලෑටි ආරක්ෂණය පිළිබඳ සමස්ත රුසියානු පර්යේෂණ ආයතනයේ මයිකොලොජි සහ ශාක රෝග විද්යාගාරයේ කාර්ය මණ්ඩලය විසින් භාර දෙන ලදී |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp. | තක්කාලි පළතුරු | ක්රස්නෝඩර් ප්රදේශය, ක්රිමියානු දිස්ත්රික්කය, ශ්රේණියේ ක්රීම් |
ෆුසාරියම් ඔක්සිස්පෝරම් | තිරිඟු මූල | මොස්කව් කලාපය |
PCR DTprime amplifier (DNA-Technology) මත සිදු කරන ලදී. PCR සඳහා, මුල් ප්රයිමර් සහ glycerol triphosphate dehydrogenase ජානයේ විශේෂ-විශේෂිත කලාපය සඳහා පරීක්ෂණයක් භාවිතා කරන ලදී: ඉදිරියට ප්රයිමර් Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA, ප්රතිලෝම ප්රයිමර් Coc280gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGGT1). ප්රයිමර් 213 bp කලාපයක් විස්තාරණය කරයි.
ප්රතික්රියාව සඳහා සම්පූර්ණ DNA වලින් 50 ng (කොළ සහ අල විශ්ලේෂණය කිරීමේදී) සහ 10 ng (පිරිසිදු දිලීර සංස්කෘතීන්ගේ DNA විශ්ලේෂණය කිරීමේදී) ගත විය. ප්රතික්රියා මිශ්රණය (35 μl) පැරෆින් ස්ථරයකින් කොටස් දෙකකට වෙන් කරන ලදී: පහළ (20 μl) හි 2 μl 10 × ප්රතික්රියා බෆරය (750 mM Tris-HCl, pH 8.8; 200 mM (NH4) 2SO4; 25 අඩංගු විය. mM MgCl2; 0.1% Tween- 20), එක් එක් ඩිඔක්සිනියුක්ලියෝටයිඩ ට්රයිපොස්පේට් වලින් 0.5 mM, එක් එක් ප්රාථමිකයේ 7 pmol සහ ජල විච්ඡේදනය කළ හැකි ප්රතිදීප්ත පරීක්ෂණයක 4 pmol; ඉහළ එකෙහි 1 × PCR බෆරයේ 10 μl සහ Taq polymerase 1 U අඩංගු විය.
පැරෆින් සමඟ මිශ්රණය වෙන් කිරීම 5 ° C උෂ්ණත්වයකදී නල දිගු කාලයක් ගබඩා කිරීමට සහ 10 ° C ට වැඩි උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 80 ක් රත් කිරීමෙන් පසු PCR සඳහා උණුසුම් ආරම්භයක් ලබා දීමට ඉඩ සලසයි. පහත දැක්වෙන වැඩසටහනට අනුව PCR සිදු කරන ලදී: 94.0 ° C - 90 s (1 චක්රය); 94.0 ° C - තත්පර 30; 64.0 ° C - තත්පර 15 (චක්ර 5); 94.0 ° C - 10 s; 64.0 ° C - 15 s (චක්ර 45); 10.0 ° C - ගබඩා කිරීම.
ප්රතිඵල සහ සාකච්ඡාව
ග්ලිසරෝල් ට්රයිපොස්පේට් ඩිහයිඩ්රොජිනේස් ජානයේ අනුපිළිවෙල රුසියාවේ විවිධ ප්රදේශවල කොළ, කඳන්, අර්තාපල් අල සහ තක්කාලි පලතුරු (කුටුසෝවා, 45) වලින් හුදකලා වූ වික්රියා 2018 කින් තීරණය විය. සියලුම වික්රියා වල අධ්යයනය කරන ලද අනුපිළිවෙල නියුක්ලියෝටයිඩ දෙකකින් වෙනස් වන කණ්ඩායම් 2 කට බෙදා ඇත. KY496634 සහ KY496635 අංක යටතේ කණ්ඩායම් දෙකේම නියෝජිතයින්ගේ නියුක්ලියෝටයිඩ අනුපිළිවෙල GenBank හි තැන්පත් කර ඇත.
ප්රාථමික coc70gdf, coc280gdr සහ ඒවායේ පදනම මත නිර්මාණය කර ඇති cocgdz පරීක්ෂණය BLAST වැඩසටහන භාවිතයෙන් පරීක්ෂා කරන ලදී (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) GenBank දත්ත ගබඩාවේ ඇති Colletotrichum සහ අනෙකුත් ජීවීන්ගේ විශේෂවල glycerol triphosphate dehydrogenase ජානයේ සියලුම අනුපිළිවෙලවල් මත.
ප්රයිමර් සහ පරීක්ෂණයට බෙහෙවින් සමජාතීය අනෙකුත් ජීවීන්ගේ DNA කලාපයක් හමු නොවීය.
විවිධ C. cocodes DNA සාන්ද්රණය සහිත සාම්පල, ඇන්ත්රැක්නෝස් ආසාදිත අල කොළයක DNA (2017 දී මාරි එල්, රතු ස්කාර්ලට් ප්රභේදයේ එකතු කරන ලදී) සහ කළු ලප (එකතු කරන ලද) අලවල ලෙලි භාවිතා කරමින් පරීක්ෂණ පද්ධතියේ සංවේදීතාව පරීක්ෂා කරන ලදී. Kostroma කලාපයේ, විවිධ රතු ස්කාර්ලට්, වගුව 2). අල සහ අල කොළ වල DNA පවතින බව තහවුරු කිරීම සඳහා C. cocodes strains ඒවායින් පිරිසිදු සංස්කෘතීන් වෙත හුදකලා කරන ලදී.
පරීක්ෂණ පද්ධතියේ සංවේදීතා විශ්ලේෂණයේ ප්රතිඵල පෙන්නුම් කරන්නේ PCR මිශ්රණයේ එහි සම්පූර්ණ අන්තර්ගතය 0.05 ng ට වඩා වැඩි වන විට නියැදියක C. cocodes DNA පවතින බව සාර්ථකව හඳුනා ගැනීමට එය භාවිතා කළ හැකි බවයි. එක් ස්ක්ලෙරෝටියාවක සාමාන්යයෙන් 0.131 ng සහ එක් බීජානුවක DNA 0.04 ng පමණ අඩංගු වන බැවින් මෙය හඳුනා ගැනීමට ප්රමාණවත් වේ (Cullen et al., 2002). ඉංග්රීසි කණ්ඩායම (Cullen et al., 2002) විසින් වර්ධනය කරන ලද පරීක්ෂණ පද්ධතිය සමාන සංවේදීතාවයක් පෙන්නුම් කළේය (එළිමහන චක්රය 34 0.05 ng DNA සහ 37 at 0.005 ng).
සෑම අවස්ථාවකදීම C. කොකෝඩ් අඩංගු ස්වාභාවික සාම්පල විශ්ලේෂණය කිරීමෙන් නියැදිය තුළ එහි පැවැත්ම විශ්වාසදායක ලෙස හෙළි කිරීමට හැකි විය (වගුව 2). DNA හුදකලා කිරීම සඳහා යෝජිත ක්රමය ස්වභාවික ශාක සාම්පල විශ්ලේෂණය සඳහා ද අදාළ විය.
වගුව 2. තත්ය කාලීන PCR සඳහා Colletotrichum cocodes හඳුනාගැනීම සඳහා යෝජිත පරීක්ෂණ පද්ධතියේ සංවේදීතාව තීරණය කිරීම
රටා | නියැදියේ DNA ප්රමාණය *, ng | එළිපත්ත චක්රය | C. කොකෝඩ් හඳුනාගැනීම |
---|---|---|---|
Mycelium Colletotrichum coccodes | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
අල ලෙලි 1 | 50 | 32 | + |
අල ලෙලි 2 | 50 | 30 | + |
අල ලෙලි 3 | 50 | 31.5 | + |
අර්තාපල් කොළ | 50 | 29.5 | + |
සටහන. * PCR නිෂ්පාදන මිශ්රණයක් තුළ.
පරීක්ෂණ පද්ධතියේ විශේෂත්වය පරීක්ෂා කිරීම දිලීර විශේෂ 15 කින් ලබාගත් DNA සාම්පල මත සිදු කරන ලදී. දිලීර වල සියලුම වික්රියා කතුවරුන් විසින් බලපෑමට ලක් වූ සහ සෞඛ්ය සම්පන්න පලතුරු සහ තක්කාලි, අර්තාපල් අල වලින් හුදකලා කර ඇත; එක් වර්ගයක් තිරිඟු මූලයෙන් හුදකලා විය (වගුව 1). පළතුරු මතුපිටින් හුදකලා වූ ඒවා අතර, තක්කාලි සඳහා ව්යාධිජනක නොවන විශේෂ ද ඇත (උදාහරණයක් ලෙස, Phellinus ferrugineovelutinus).
අධ්යයනවලින් පෙන්නුම් කර ඇත්තේ C. cocodes DNA 20-27 එළිපත්ත චක්රයකදී අනාවරණය වූ අතර අනෙකුත් දිලීර විශේෂ හඳුනා නොගත් අතර චක්රය 40 ට පසුව සංඥාවක් ලබා දී නොමැති අතර එය නිශ්චිත නොවන ශබ්ද ආචරණයකට ආරෝපණය කළ හැකිය (වගුව 3).
වගුව 3. විවිධ වර්ගයේ හතු සඳහා පරීක්ෂණ පද්ධතිය පරීක්ෂා කිරීම
බිම්මල් නම | එළිපත්ත චක්රය |
Colletotrichum cocodes 1 | 20.9 |
C. කොකෝඩ්ස් 2 | 22.6 |
C. කොකෝඩ්ස් 3 | 23 |
C. කොකෝඩ්ස් 4 | 22 |
ෆුසාරියම් ඔක්සිස්පෝරම් | > 40 |
F. වර්ටිසිලියම් | > 40 |
රයිසොක්ටෝනියා සොලනි | > 40 |
ෆොමොප්සිස් ෆේසෝලි | > 40 |
Alternaria alternata | > 40 |
A. තක්කාලිෆිල | > 40 |
හෙල්මින්තොස්පෝරියම් සොලනි | > 40 |
Phellinus ferrugineovelutinus | > 40 |
ස්ටෙම්ෆිලියම් වෙසිකරියම් | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
Cladosporium cladosporioides | > 40 |
C. fulvum | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
පෙනිසිලියම් sp. | > 40 |
සටහන. * සියලුම සාම්පලවල DNA ප්රමාණය 10 ng විය.
තක්කාලි කොළ සාම්පලවල ඇති C. කොකෝඩ් හඳුනාගැනීම සඳහා සංවර්ධිත පරීක්ෂණ ක්රමය භාවිතා කරන ලදී නෙක්රොට්රොෆික් රෝග කාරක සහ බීජ අල අල දෘෂ්ය රෝග ලක්ෂණ නොමැතිව. අධ්යයනය සඳහා, අපි කොස්ට්රෝමා, මොස්කව්, කළුගා, නිශ්නි නොව්ගොරොඩ් ප්රදේශවල වගා කරන විවිධ ප්රභේදවල බීජ අල ගත්තෙමු. C. cocodes DNA තිබීම සාම්පලවල සැලකිය යුතු ලෙස සලකනු ලැබූ අතර, විශ්ලේෂණයේ දී එළිපත්ත චක්රය 35 නොඉක්මවන ලදී. C. cocodes DNA හි 0.05 ng විශ්වාසනීය නිර්ණය මත පදනම්ව මෙම එළිපත්ත අගය තෝරා ගන්නා ලදී ( එළිපත්ත චක්රය 33.5, වගුව 2) සහ එළිපත්ත චක්ර 40 ට වඩා වැඩි වීම, වෙනත් සමහර දිලීර විශේෂවල නිශ්චිත නොවන DNA හඳුනා ගන්නා ලදී. මෙම ප්රවේශය සමඟ, කොස්ට්රෝමා, මොස්කව්, කළුග ප්රදේශවල වගා කරන ලද අල සාම්පල 5 ක් සහ ක්රස්නෝඩර් කලාපයේ යීස්ක් ප්රදේශයෙන් එක් තක්කාලි කොළයක C. cocodes DNA හි සැලකිය යුතු පැවැත්මක් අනාවරණය විය (වගුව 4, 5).
වගුව 4. අර්තාපල් අල මත කොලෙටොට්රිචම් කොකෝඩ් හඳුනාගැනීම *
සාම්පල අංකය | අර්තාපල් ප්රභේදය | වර්ධනය වන ස්ථානය | C. කොකෝඩ් හඳුනාගැනීම | එළිපත්ත චක්රය |
---|---|---|---|---|
1 | රතු ස්කාර්ලට් | කොස්ට්රෝමා කලාපය | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | සැන්ටේ | මොස්කව් කලාපය | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhukovsky කලින් | මොස්කව් කලාපය | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | මොලී | කළුග කලාපය | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | ෆැන්ටසි | කළුග කලාපය | - | |
15 | ගාලා | නිශ්නි නොව්ගොරොඩ් කලාපය. | - | |
16 | - |
සටහන. * සියලුම සාම්පලවල DNA ප්රමාණය 50 ng විය.
වගුව 5. තක්කාලි කොළ මත Colletotrichum coccodes හඳුනා ගැනීම *
සාම්පල අංකය | වර්ධනය වන ස්ථානය | C. කොකෝඩ් හඳුනාගැනීම | එළිපත්ත චක්රය |
---|---|---|---|
1 | ක්රස්නෝඩර් ප්රදේශය, ක්රිමියානු දිස්ත්රික්කය | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | Krasnodar ප්රදේශය, Yeisk දිස්ත්රික්කය | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* සියලුම සාම්පලවල DNA ප්රමාණය 50 ng විය.
අප විසින් නිර්මාණය කරන ලද පරීක්ෂණ ක්රමය බ්රිතාන්ය පර්යේෂකයන් (Cullen et al., 2002) විසින් සංවේදිතාවයෙන් සහ විශේෂත්වයෙන් වැඩි දියුණු කරන ලද ඒවාට වඩා පහත් නොවන අතර ශාක සාම්පල විශ්ලේෂණය සඳහා සුදුසු වේ. බීජ අල විශ්ලේෂණය සඳහා එහි යෙදුම හානි පිළිබඳ බාහිර සංඥා නොමැතිව අල තුළ C. cocodes DNA හඳුනා ගැනීමට සහ කොළ ආසාදනය සාර්ථකව විශ්ලේෂණය කිරීමට හැකි විය.
අද වන විට, C. coccodes ආසාදනය සඳහා අර්තාපල් අල පිළිබඳ විශ්ලේෂණයක් රුසියාවේ සිදු කර නොමැත. අපගේ පළමු අධ්යයනයෙන් පෙන්නුම් කළේ රුසියානු සමූහාණ්ඩුවේ විවිධ ප්රදේශවල වගා කරන ලද පරීක්ෂා කරන ලද බීජ අල 16 න් 5 ක් සී කොකෝඩ් අඩංගු බවයි. මෙයින් පෙන්නුම් කරන්නේ අර්තාපල් අල වල කළු ලප රුසියාවේ බහුලව දක්නට ලැබෙන අර්තාපල් රෝගයක් වන අතර අර්තාපල් බෝගයේ පරිමාව හා ගුණාත්මකභාවය අඩු කිරීම සඳහා එහි කාර්යභාරය අවතක්සේරු කර ඇති බවයි.
තක්කාලි කොළ විශ්ලේෂණය Krasnodar ප්රදේශයේ Yeisk දිස්ත්රික්කයේ එක් පත්රයක C. coccodes DNA සැලකිය යුතු ලෙස පවතින බව අනාවරණය විය. මීට පෙර, බ්රිතාන්ය පරීක්ෂණ ක්රමය (Cullen et al., 2002) භාවිතයෙන් දකුණු රුසියාවේ තක්කාලි ක්ෂේත්ර පරීක්ෂා කිරීමේදී C. කොකෝඩ් අඩංගු කොළ හඳුනාගෙන ඇති අතර සමහර ක්ෂේත්රවල C. කොකෝඩ් ආසාදනය වූ කොළ විශාල ප්රමාණයක් හමු විය (Belov et අල්., 2018). මොස්කව් කලාපයේ Krasnodar සහ Primorsky ප්රදේශ වල, අපි තක්කාලි පලතුරු සොයා ගත් අතර, C. cocodes හි පිරිසිදු සංස්කෘතීන් හුදකලා කිරීමට අපි සමත් විය. C. coccodes දැනට විශ්වාස කරනවාට වඩා රුසියාවේ තක්කාලි මත බහුලව පැතිරී ඇති අතර එහි හානිකර බව ද අවතක්සේරු කර ඇත.
මේ අනුව, අද වන විට, අර්තාපල් සහ තක්කාලි මත සී කොකෝඩ් වල පුළුල් ව්යාප්තිය පිළිබඳ ප්රමාණවත් තොරතුරු රැස් කර ඇත.
අර්තාපල් සහ තක්කාලි රෝග වර්ධනය කිරීමේදී මෙම දිලීරයේ කාර්යභාරය වඩා හොඳින් අවබෝධ කර ගැනීම සඳහා, රුසියාවේ එහි ව්යාප්තිය නිරීක්ෂණය කිරීම, පාංශු හා බීජ ආසාදනවල භූමිකාව අධ්යයනය කිරීම සහ ගබඩා කිරීමේදී සිදුවන පාඩු වල කළු පැල්ලමේ භූමිකාව අධ්යයනය කිරීම අවශ්ය වේ. PCR රෝග විනිශ්චය භාවිතා කිරීම මෙම කාර්යයට සැලකිය යුතු ලෙස පහසුකම් සැලසිය හැකි අතර, පරීක්ෂණ පද්ධති දෙකම එකවර භාවිතා කිරීම විශ්ලේෂණයේ නිරවද්යතාව සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි කරනු ඇත.
රුසියානු විද්යා පදනම අංක 18-76-00009 හි ප්රදානයක් මගින් මෙම කාර්යයට සහාය විය.
ලිපිය "Mycology and Phytopathology" සඟරාවේ ප්රකාශයට පත් කරන ලදී (වෙළුම 54, අංක 1, 2020).